葉酸檢測試劑盒流程使用與避坑指南

1.樣本采集與處理規(guī)范  

標(biāo)本新鮮度：血清/血漿需在采集后2小時內(nèi)分離，避免溶血（溶血會導(dǎo)致葉酸值虛高，因紅細(xì)胞含高濃度葉酸）和脂血（脂血會干擾檢測結(jié)果，需空腹12小時采血）。標(biāo)本在2-8℃可穩(wěn)定2天，-20℃可穩(wěn)定1個月，但僅允許1次凍融，避免反復(fù)解凍導(dǎo)致葉酸降解。  

抗凝劑選擇：血漿樣本需使用EDTA或檸檬酸鈉抗凝，禁止使用肝素（可能抑制酶反應(yīng)）；尿液、胸腹水等需離心取上清，細(xì)胞培養(yǎng)上清需通過反復(fù)凍融釋放細(xì)胞內(nèi)葉酸。  

特殊處理要求：含生物素（>5mg/d）治療患者需停藥8小時后采血；避免使用疊氮鈉防腐（抑制HRP活性）；高劑量維生素C或亞葉酸可能干擾檢測，需提前告知實驗室。  

2.試劑保存與操作細(xì)節(jié)  

儲存條件：試劑盒需2-8℃保存，避免冷凍；底物A、B需避光保存，防止揮發(fā)或光解；標(biāo)準(zhǔn)品稀釋后不可儲存，需現(xiàn)配現(xiàn)用；不同批號試劑嚴(yán)禁混用，避免影響檢測線性。  

操作流程：試劑使用前需室溫平衡15-30分鐘；加樣時使用一次性吸頭，避免交叉污染；溫育時間（如37℃孵育）需嚴(yán)格計時，誤差≤5分鐘；洗滌時需充分拍干，避免殘留液影響顯色反應(yīng)；顯色反應(yīng)需避光進(jìn)行，終止液加入后15分鐘內(nèi)完成OD值讀取。  

儀器校準(zhǔn)：酶標(biāo)儀需定期校準(zhǔn)波長（450nm）和光路，確保吸光度測量準(zhǔn)確性；洗板機(jī)需驗證洗滌次數(shù)和體積，避免洗板導(dǎo)致背景值升高。  

3.結(jié)果解讀與質(zhì)量控制  

參考范圍：成人血清葉酸正常范圍為3-20ng/mL（不同檢測方法差異大，需參考試劑盒說明書）；孕婦需關(guān)注紅細(xì)胞葉酸（≥340nmol/L）以評估長期儲備，血清葉酸僅反映短期攝入。  

干擾因素：溶血、脂血、黃疸可能干擾結(jié)果；氨基蝶呤、甲氨蝶呤等結(jié)構(gòu)類似物可能與葉酸競爭結(jié)合，導(dǎo)致假陰性；高劑量生物素（>50ng/mL）可能抑制電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。  

質(zhì)量控制：每批檢測需包含校準(zhǔn)品（至少6個濃度點）和質(zhì)控品（高、中、低值）；結(jié)果需通過線性回歸（R²≥0.99）和重復(fù)性（CV≤10%）驗證；異常結(jié)果需復(fù)測或結(jié)合其他方法（如LC-MS/MS）確認(rèn)。  

4.特殊場景與安全防護(hù)  

臨床應(yīng)用：孕婦需在孕前3個月開始補(bǔ)充葉酸，檢測可評估補(bǔ)充效果；巨幼細(xì)胞性貧血患者需結(jié)合維生素B12檢測，避免誤診；腫瘤患者需監(jiān)測葉酸水平，指導(dǎo)化療藥物（如甲氨蝶呤）劑量調(diào)整。  

安全操作：實驗人員需佩戴手套、口罩和護(hù)目鏡，避免接觸終止液和底物；廢棄物需按生物危害處理，防止環(huán)境污染；試劑盒過期的組分不可使用，需按說明書報廢。